紫云英转脂蛋白AsE246互作蛋白AsDJL1的鉴定及共生固氮功能研究

【摘要】在前期工作中,本研究室构建了在紫云英根瘤中增强表达的cDNA文库,从文库中筛选获得若干根瘤特异表达的紫云英基因。其中编码转脂质蛋白(LTP)的基因AsE246经进一步研究表明其作用与共生固氮密切相关。利用酵母双杂交技术,我们筛选获得了与AsE246相互作用的候选靶蛋白基因AsDJL1的部分结构域oAsDJL1是DnaJ-like的同源基因,DnaJ蛋白是分子伴侣Hsp70蛋白的辅助蛋白,具有多种生物学功能,能够激活ATPase的活性,帮助蛋白折叠和进一步加工,增强生物抗性,使细胞膜免受重金属伤害等。本课题对AsDJL1在与LTP基因AsE246的互作鉴定及其在紫云英共生固氮中的功能展开研究。首先利用cDNA末端快速扩增(RACE)方法获得AsDJL1基因的全长,通过生物信息方法分析了该基因的功能结构域,通过构建系列截短突变体,在酵母双杂交体系中验证了两个目标蛋白的相互作用,确定了其互作的关键结构域。采用pull-down实验技术,证实了AsDJL1蛋白关键结构域在体外与AsE246蛋白的互作。进一步采用双分子荧光互补技术(BiFC),检测了AsE246和AsDJL1在植物活细胞体内的蛋白相互作用及初步定位。通过构建目标基因的超表达及沉默载体,检测了基因AsDJL1沉默和超表达后的共生固氮表型,为进一步研究AsDJL1蛋白在结瘤和固氮中的功能机制奠定良好工作基础。
【作者】王丽虹；
【导师】陈大松；
【作者基本信息】华中农业大学，微生物学，2014，硕士
【关键词】紫云英；AsE246；AsDJL1；蛋白质相互作用；共生固氮；

【参考文献】
[1]文抑西,黄威,虎小毅,唐俊星.腭部瘢痕力对腭裂上颌骨影响的有限元研究[J].实用口腔医学杂志-5.
[2]赵喜龙.人工林杨树木材皱缩恢复工艺与机理研究[D].内蒙古农业大学,木材科学与技术,2013,博士.
[3]艾丁.XX商业银行个人信贷业务风险及其防范研究[D].首都经济贸易大学,金融学（专业学位）,2013,硕士.
[4]张磊.静电纺丝法合成改性TiO_2纳米材料及其光催化性能研究[D].西安工程大学,应用化学,2012,硕士.
[5]孙扬.快速向心结合不同速度离心训练对踝关节屈伸快速力量的影响[D].北京体育大学,社会体育指导,2013,硕士.
[6]樊海滨.企业市场营销策略研究——柳工装载机市场营销分析[D].南京理工大学,2002.
[7]邹伶威.美洲南瓜裸仁基因的SSR分子标记[D].黑龙江大学,生物化学与分子生物学,2013,硕士.
[8]马翰斌.家庭成员间隐私权及其保护研究[D].华中师范大学,民商法学,2013,硕士.
[9]薛飞.黄元御《四圣心源》中气论与经方应用[D].云南中医学院,中医临床基础,2012,硕士.
[10]黎明武.4NQO饮水法诱发小鼠口腔癌淋巴道转移模型的改进以及骨髓播散细胞的提取及鉴定[D].广西医科大学,口腔颌面外科,2013,硕士.
[11]孙彦.风险决策中框定效应的实验研究[D].湖南师范大学,发展与教育心理学,2004,硕士.
[12]沈青.基于ITIL的云监控系统的研究与设计[D].华中师范大学,计算机系统结构,2013,硕士.
[13]马丽莉.人体体液/组织差异性甲基化片段的筛选[D].华中科技大学,法医遗传学,2013,硕士.
[14]余敏文,王淑花,秦宝荣,蔡欢,刘江.双轴切割机床龙门机架的设计与研究[J].机械设计与制造工程,2015,01:33-36.
[15]朱音.汉斯·季默《加勒比海盗Ⅱ：聚魂棺》电影配乐分析[D].天津音乐学院,音乐（专业学位）,2014,硕士.
[16]李丰.城镇职工基本医疗保险制度改革研究[D].内蒙古大学,公共管理,2013,硕士.
[17]张全娜.论无单放货的责任归属和风险防范[D].安徽大学,国际商务,2013,硕士.
[18]赵文文.复杂网络上交通动力学行为研究[D].南京邮电大学,控制理论与控制工程,2013,硕士.
[19]袁德宇.类人猿机器人复杂地貌下路径搜索与全方位步行研究[D].哈尔滨工业大学,机械设计及理论,2014,硕士.
[20]吴长波,周拜豪,崔海涛,高源.小展弦比带掠风扇转子叶片的耦合颤振[J].航空动力学报,2014,12:2885-2890.
[21]孟楠楠.恐怖主义犯罪立法完善探究[D].西南政法大学,刑法学,2012,硕士.
[22]王茜.马尾松胚性培养物增殖与成熟DNA甲基化多态性研究[D].中南林业科技大学,森林培育,2014,硕士.
[23]朱英,万梅香,江雷.聚苯胺微/纳米结构及其应用[J].高分子通报,2011,10:15-32.
[24]李倩.基于PXA270的GPS车载导航系统开发[D].电子科技大学,软件工程（专业学位）,2012,硕士.
[25]金平.U集团财务管控问题及对策研究[D].首都经济贸易大学,工商管理（专业学位）,2013,硕士.
[26]周巧灵.农民工随迁子女义务教育公平问题研究[D].江西农业大学,思想政治教育,2012,硕士.
[27]胡宁.减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔcyaΔasdSL1344缺失株的构建及其生物学特性[D].河南科技大学,基础兽医学,2014,硕士.
[28]孙森.FY油田二次开发项目后评价[D].吉林大学,工业工程,2012,硕士.
[29]吴秉哲.贯彻产业政策推动专用汽车发展[J].专用汽车.1989(03)
[30]王伟.2011-2012年中国女排10场重要比赛背后快攻战术运用分析[D].鲁东大学,运动训练（专业学位）,2013,硕士.
[31]徐维秀.浅水域检波点自动重定位技术[J].石油地球物理勘探,2011,01:6-11+164+167.
[32]施政达.斗笠式刀库槽轮传动装置的设计与研究[D].内蒙古农业大学,机械工程,2013,硕士.
[33]李冬梅,胡恒章.一般型最优有限预见控制及其在地形跟踪中的应用研究[J].控制与决策,2001,S1:652-656.
[34]周瑛.基于朴素贝叶斯的移动客户职业识别算法与调试[D].内蒙古大学,电子与通信工程,2013,硕士.
[35]刘玢.最终控制人性质对盈余管理与投资效率关系影响研究[D].新疆财经大学,会计学,2013,硕士.
[36]郭俊俊.旅游虚拟社区成员行为对旅游决策的影响研究[D].浙江大学,2008.
[37]王岳婷.我国检察权属性及行使问题研究[D].辽宁师范大学,法学,2012,硕士.
[38]谢欢欢,张如范,张莹莹,魏飞.高密度水平超长碳纳米管阵列的制备[A].中国化学会.中国化学会第29届学术年会摘要集——第30分会：低维碳材料[C].中国化学会:,2014:1.
[39]闫娟.郑州市高职院校网球运动开展现状及改进措施探讨[D].湖北大学,体育教育训练学,2012,硕士.
[40]张磊.碱性离子液体催化多组分反应合成吡喃衍生物[D].浙江工业大学,2013.
[41]姜梅.蕾二歧灯芯柳珊瑚活性成分和构效关系研究[D].第二军医大学,药物化学,2013,硕士.
[42]陈好.预制板外廊式砖砌体结构抗震加固性能分析[D].兰州理工大学,结构工程,2013,硕士.
[43]彭鑫.弹塑体在沥青混合料中的适应性研究[D].长安大学,道路与铁道工程,2013,硕士.
[44]夏卉芳.菟丝子水提液对大鼠胚胎发育毒性的实验研究[D].遵义医学院,人体解剖与组织胚胎学,2012,硕士.
[45]古晓花.自尊对建议采纳的影响[D].苏州大学,应用心理学,2014,硕士.
[46]喻雨.关于中国日语学习者的汉字误用考察[D].华中科技大学,日语语言文学,2013,硕士.
[47]许洁君.我国反垄断执法研究[D].湖北大学,宪法与行政法学,2011,硕士.
[48]陈静.上海地区物流产业与经济发展相关性分析研究[D].上海师范大学,国民经济学,2013,硕士.
[49]杨静.父权制下被压抑的女性[D].四川外国语大学,英语语言文学,2013,硕士.
[50]王丹琦.科学发展观视域下大学校园文化建设研究[D].南京财经大学,马克思主义基本原理,2012,硕士.